細胞轉染方法對比，以及各類方法的優(yōu)缺點，我們都已介紹過了。

今天來到細胞轉染——技巧篇，談談如何才能進行高效地轉染。

轉染試劑的選擇

不同細胞系轉染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據實驗的需要，因此在轉染實驗前應根據實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。

每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選擇適合實驗設計的轉染試劑。當然，適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。

細胞狀態(tài)

一般低的細胞代數（<50）能確保基因型不變。適合轉染的細胞是經過幾次傳代后達到指數生長期的細胞，細胞生長旺盛，最容易轉染。

細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。也就是說同一種系的細胞株，在各實驗室不同培養(yǎng)條件下，其生物學性狀發(fā)生不同程度的改變，導致其轉染特性也發(fā)生變化。

因此，如果發(fā)現轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復最佳結果。

轉染方法

轉染時應根據具體轉染試劑推薦的方法進行，但也要根據實驗室的條件來確定最佳轉染條件。
（1）細胞培養(yǎng)物

推薦在轉染前24小時分細胞，這將提供正常細胞代謝，增加對外源DNA攝入的可能。一定要避免細菌，支原體或真菌的污染。

（2）細胞密度
細胞密度對轉染效率有一定的影響。如果選用新的細胞系或者新的轉染試劑，最好能夠進行優(yōu)化實驗并為以后的實驗建立一個穩(wěn)定方法，包括適當的接種量和培養(yǎng)時間等等。

（3）血清
對于主流的轉染試劑來說，血清的存在不會影響轉染效率，甚至還有助于提高轉染效率。

不過要特別注意：對于RNA轉染，如何消除血清中潛在的RNase污染是值得關注的。

胎牛血清經常用到，便宜一點的有馬或牛血清。通常的，血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物，對不同細胞的生長作用有很大的差別。血清質量的變化直接影響細胞生長，因此也會影響轉染效率。新加培養(yǎng)基的預熱對細胞轉染很有幫助。

（4）氮磷（N/P）比
N/P比是轉染效率的關鍵（為了換算方便，一般以DNA/轉染試劑質量比表示），在一定比例范圍內轉染效率隨N/P比成比例增高，之后達到平值，但毒性也隨之而增加，因此在實驗之前應根據推薦比例，確定本實驗的最佳轉染比例。
（5）DNA質量
DNA質量對轉染效率影響非常大。應盡可能提高DNA的純度。

載體構建

轉染載體的構建（病毒載體，質粒DNA，RNA，PCR產物，寡核苷酸等）也影響轉染結果。

病毒載體對特定宿主細胞感染效率較高，但不同病毒載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細胞周期，如逆轉錄病毒需侵染分裂期的宿主細胞，此外還需考慮一些安全問題（如基因污染）。

除載體構建外，載體的形態(tài)及大小對轉染效率也有不同的影響，如前面提到的超螺旋及線性DNA對瞬時和穩(wěn)定轉染的影響。如果基因產物對細胞有毒性作用，轉染也很難進行，因此選擇組成或可調控，強度合適的啟動子也很重要，同時做空載體及其它基因的相同載體構建的轉染正對照可排除毒性影響的干擾。

血清在細胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻：

• 提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。

• 提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調節(jié)它們所結合的物質活力。

• 有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。

• 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源。

• 起酸堿度緩沖液作用。

• 提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

• 參與細胞凍存。

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