原代細胞培養也被稱為初代培養，是建立細胞系的第一步。

原代細胞培養的應用廣泛：

1. 為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；

2. 為傳代培養創造條件；

3. 服務于臨床實踐，用于藥物篩選等。

其步驟包括取材→分離→培養和維持。

原代細胞培養需要一定的技巧，尤其是一些細節，不然很容易翻車，今天給大家匯總了一些原代細胞培養的小技巧，希望大家能有所收獲！

取材

取材是原代細胞培養過程中的第一步，也是至關重要。

下表為一些常見組織的取材注意事項。

 

分離

一、組織塊培養法

1、組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。為保證組織塊附著于瓶壁上，要避免頻繁晃動。

2、加入的培養液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。

3、當細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產生的有毒物質會影響原代細胞的生長。

4、為促進組織塊盡快粘貼在培養瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養瓶底壁上。

二、貼壁型原代細胞

1、原代培養的分離細胞，在初次接觸體外環境時，細胞之間會互相影響，產生一些促生長的活性物質，促進彼此的存活和生長。

因此，接種密度要適宜。如果接種的細胞密度過低，細胞之間的促生長作用很小，也很難使細胞適應從體內的組織環境到被分散后進入獨立生存環境的變化過程；如果接種的細胞密度過大，會導致營養物質供應不足，代謝廢物積累較快需要經常換液和傳代。

2、盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養能否成功的關鍵。可以在接種后先將培養瓶置培養箱內培養3h到5h，待細胞貼壁后，再補足培養液繼續培養。

三、懸浮型原代細胞

1、必須保持細胞的懸浮狀態。可以通過增加培養液的黏度來幫助細胞呈懸浮狀態，如給培養液中加入低濃度的透明質酸復合物。在有攪拌裝置的培養器皿內加入培養液，以5ml為最di限度，否則攪拌時會產生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則既容易使培養液溢出又容易造成污染。如果培養液的量在5ml以下，可以采用旋轉瓶培養。給懸浮培養的細胞換液時要注意不要吸出細胞。

2、能夠進行懸浮培養的細胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營養成分消耗大，換液時間隔一般較短。

培養

當原代細胞狀態穩定后，就可按照正常細胞培養流程進行培養即可。

血清在細胞培養過程中的重要性不言而喻：

• 提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。

• 提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調節它們所結合的物質活力。

• 有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。

• 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。

• 起酸堿度緩沖液作用。

• 提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

• 參與細胞凍存。

• ......

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